不同加工方法对中药溪黄草主要化学成分的影响

摘要：为比较不同加工方法对3个品种溪黄草[Rabdosia serra （Maxim.） Hara]药材中迷迭香酸、总二萜、总黄酮含量的影响，以寻找出溪黄草药材的最适加工方法，为溪黄草药材GAP基地的建设提供一定的参考，以溪黄草、线纹香茶菜[Rabdosia lophanthoides（Buch.-Ham.ex D.Don）Hara]、纤花香茶菜[Rabdosia lophanthoides （Buch.-Ham.ex D.Don）Hara var.graciliflora （Benth.）Hara]为材料，分别采用不同的加工方法处理，采用HPLC测定样品中迷迭香酸含量，采用紫外-可见分光光度法测定样品中总二萜和总黄酮的含量。结果表明，不同加工方法对迷迭香酸的含量影响较大，而对总二萜和总黄酮的含量影响不显著，经远红外干燥和烘干工艺处理的样品中3种成分的含量普遍偏低，而经阴干工艺处理的样品中3种成分含量普遍偏高。说明不同加工方法对中药溪黄草中3种成分含量有影响，从活性成分的损失和节约生产成本等方面综合考虑，建议对溪黄草品种采用鲜切段后再阴干的加工方法，线纹香茶菜和纤花香茶菜采用阴干后再干切段的方法质量较好。

关键词：溪黄草[Rabdosia serra （Maxim.） Hara];加工方法;迷迭香酸;总二萜;总黄酮

中图分类号：R284.1        文献标识码：A        文章编号：0439-8114（2014）21-5217-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.21.043

Effects of Different Processing Methods on the Main Chemical Compositions of Linearstripe Rabdosia Herb

PAN Xue-feng1，2， ZHANG Hui-ye2， LIN Jian-yun2， XU Xiao-fei2， LI Ming1， DENG Qiao-hua2

（1.School of Traditional Chinese Medicine， Guangdong Pharmaceutical University， Guangzhou 510006， China;

2.Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan Chinese Medicine Company Limited， Guangzhou 510515， China）

Abstract： To find out the optimal processing method of Linearstripe Rabdosia Herb and further provide a reference for building the GAP planting base of Linearstripe Rabdosia Herb， the effects of different processing methods on the content of rosmarinic acid， total diterpenoids and total flavonoids were studied. The materials included Rabdosia serra （Maxim.） H.Hara， Rabdosia lophanthoides（Buch.-Ham.ex D.Don） H.Hara， Rabdosia lophanthoides （Buch.-Ham.ex D.Don） H.Hara var.graciliflora （Benth.） H.Hara. The content of rosmarinic acid was analyzed by HPLC. The content of total diterpenoids and total flavonoids were determined by UV spectrophotometry. The results showed that the effect of different processing on the content of rosmarinic acid were higher. The influence on the content of total diterpenoids and total flavonoids was not significant by different processing methods. The contents of three kinds of chemical component were generally lower when treated by far-infrared dryer and stoving. The contents of the three components were generally higher when dried in shade. It is indicated that processing method had influence on the contents of chemical component in Linearstripe Rabdosia Herb. It is advised that the Rabdosia serra （Maxim.） H.Hara should be fresh-cut first and then dried in the shade. Rabdosia lophanthoides （Buch.-Ham.ex D.Don） H.Hara var.graciliflora （Benth.） H.Hara should be dried in the shade first and then drily cut considering the comprehensive evaluation of active constituents and cost of production.

Key words： Rabdosia serra （Maxim.） Hara; processing method; rosmarinic acid; total diterpenoids; total flavonoids

溪黄草[Rabdosia serra （Maxim.） Hara]为民间习用草药，具有清热解毒、利湿退黄、散瘀消肿的功效，主治湿热黄疸、胆囊炎等疾病，主产于长江以南的广东、广西、江西、福建等省区，俗称熊胆草、黄汁草、手擦黄等，因喜生山谷溪旁潮湿处，新鲜叶片揉搓有棕黄色液汁而得名[1，2]。广东省作为药用的溪黄草品种主要有：线纹香茶菜[Rabdosia lophanthoides（Buch.-Ham.ex D.Don）Hara]及其变种纤花（细花）香茶菜[Rabdosia lophanthoides （Buch.-Ham.ex D.Don）Hara var.graciliflora （Benth.）Hara][3，4]，另外，溪黄草[Rabdosia serra （Maxim.）Hara]在部分药材市场上也被用作溪黄草药材流通。《中药大辞典》（下册）[5]中记载：溪黄草地上部分主要含有的二萜类化合物具有抗肿瘤活性，其黄酮类物质对羟自由基和氧自由基具有清除作用。近年来，有研究发现溪黄草中含有迷迭香酸成分[6]，迷迭香酸为天然抗氧化剂[7]，而溪黄草药材治疗肝炎的物质基础，即涉及抑制乙肝病毒的有效部位和活性成分，可能与高效抗氧化物质对细胞的保护作用有关[8]。

中药材在采收后，一般都须进行产地加工，产地加工是保证药材质量的重要环节，对于药材进一步加工炮制起着决定性作用。早在唐代孙思邈的《千金翼方》就有“夫药采取不知时节，不知阴干曝干，虽有药名，终无药实”的论述，阐明了正确的采收加工对中药质量的重要意义。目前，文献关于溪黄草药材的产地加工研究较少，笔者经多年产地调研发现各地种植户采用的基本是采收后直接晒干的方法。鉴于其他草本类中药材，如穿心莲[9]、马齿苋[10]、黄花蒿[11]等在经过不同加工方法后其主要有效成分含量变化显著。为了提高溪黄草药材的质量及为GAP基地的建设提供参考资料，有必要对溪黄草药材的加工方法进行探索。本试验通过测定经不同加工方法处理后的溪黄草药材中迷迭香酸、总二萜、总黄酮3种活性成分的含量，以期为确定溪黄草药材最佳产地加工方法提供科学依据，为按中药材GAP原则制定相关标准操作规程（SOP）并实施推广应用提供基础研究资料。

1  材料与方法

1.1  材料

仪器和试剂：Agilent1260型高效液相色谱仪（包括四元泵、DAD二极管阵列检测器、自动进样器，安捷伦科技有限公司）;UV-2550型紫外-可见分光光度计（日本岛津）;H.H.S6型电热恒温水浴锅（上海浦东荣丰科学仪器有限公司）;DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）;766-OAT型远红外辐射干燥箱（上海锦屏仪器仪表有限公司通州分公司）;BT214D和CP225D型电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）等。迷迭香酸对照品（纯度≥98%）购自成都曼思特生物科技有限公司，冬凌草甲素和芦丁对照品（批号111721-200602，100080-200306）均购于中国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯，水为去离子水，其他试剂均为分析纯。

样品：本试验所用3个品种溪黄草药材均采自广州白云山和记黄埔中药有限公司溪黄草基地，经广东药学院中药学院李明教授鉴定为线纹香茶菜[Rabdosia lophanthoides（Buch.-Ham.ex D.Don） Hara]、纤花香茶菜[Rabdosia lophanthoides （Buch.-Ham.ex D.Don） H.Hara var.graciliflora （Benth.） Hara]、溪黄草[Rabdosia serra （Maxim.） Hara]。

1.2  方法

1.2.1  样品加工方法  3个品种药材采收后随机分组，采用不同的加工方法处理（表1）后粉碎并过60目筛，备用。

1.2.2  迷迭香酸的含量测定

1）色谱条件：Dikma Diamonsil（2）C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液（43∶57）;柱温25 ℃;检测波长330 nm;流速1.0 mL/min，进样量10 μL。理论塔板数按迷迭香酸计应不低于5 000，分离度大于1.5。

2）对照品溶液的制备：精密称取迷迭香酸对照品2.00 mg，置100 mL容量瓶中，加70%乙醇溶液稀释制成0.02 mg/mL的溶液，摇匀，即得。

3）供试品溶液的制备：取样品粉末约0.1 g，精密称定，置150 mL具塞锥形瓶中，加入70%乙醇溶液20 mL，摇匀，置85 ℃水浴加热回流1 h，放冷，滤过，用溶剂洗涤残渣2～3次，合并滤液，再用溶剂定容至25 mL容量瓶中。进样前过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液供HPLC分析。按以上色谱条件得到对照品迷迭香酸和3个品种样品色谱图（图1、图2）。

4）方法学验证：迷迭香酸进样量在0.04～0.60 μg时线性关系良好，其回归方程为Y=2 801.8X+ 12.395（R2=0.999 9，n=6）;精密度、稳定性、重复性RSD分别为0.46%、1.07%、2.91%;平均回收率为100.9%，RSD为2.38%。

1.2.3  总二萜、总黄酮的含量测定

1）方法与条件：本试验采用紫外可见分光光度法测定总二萜和总黄酮的含量，以冬凌草甲素为对照品，在238 nm处测定总二萜的含量，以芦丁为对照品，在257 nm处测定总黄酮的含量。

2）对照品溶液的制备：①冬凌草甲素对照品溶液制备：精密称取冬凌草甲素对照品5.07 mg，置于20 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得0.253 5 mg/mL的标准溶液。②芦丁对照品溶液制备：精密称取芦丁对照品15.08 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得0.301 6 mg/mL的标准溶液。

3）供试品溶液的制备：取本品粉末约1.0 g，精密称定，置250 mL具塞锥形瓶中，加入50%乙醇溶液40 mL，摇匀，水浴回流45 min，放冷，滤过，用溶剂洗涤残渣2～3次，合并滤液，用溶剂定容至50 mL容量瓶中，摇匀，精密吸取0.5 mL溶液，置于25 mL容量瓶中，再加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

4）方法学验证：冬凌草甲素质量浓度在 0.005 07～0.050 70 mg/mL时线性关系良好，其回归方程为A1=25.032C1-0.000 2，R2=0.999 8;精密度、稳定性、重复性RSD分别为0.97%、2.36%、2.38%;平均回收率为99.89%，RSD为2.54%。芦丁质量浓度在0.003 77～0.060 32 mg/mL时线性关系良好，其回归方程为A2=29.755C2-0.002 3，R2=0.999 9;精密度、稳定性、重复性RSD分别为0.34%、1.27%、1.82%;平均回收率为100.94%，RSD为2.09%。

2  结果与分析

不同加工方法的3个品种溪黄草药材主要化学成分含量（以干燥品计）测定结果见表2。由表2可见，不同加工方法对所有样品3种化学成分的含量均有一定的影响，其中对迷迭香酸的含量影响较大，而对总二萜和总黄酮的含量影响不显著。溪黄草品种所含迷迭香酸的量较其他两个品种偏低，而3个品种所含总二萜和总黄酮的量差异较小。经远红外干燥和烘干工艺处理的样品中3种成分的含量普遍偏低，经阴干工艺处理的样品中3种成分含量普遍偏高，这可能与高温易破坏成分的结构有关，故阴干有助于提高溪黄草药材的质量，干燥前是否切段对成分的含量会产生一定的影响。

溪黄草品种经方法9处理的样品3种成分的含量均最低，总含量为5.424%，其中迷迭香酸的含量仅为0.034%，与最高含量组（方法8）0.554%相差近16倍，而总二萜和总黄酮的含量差异较小;经方法3处理的样品3种成分总含量最高，为9.425%，且总二萜和总黄酮含量均最高。线纹香茶菜品种经方法1处理的样品3种成分的含量均最低，总含量为7.184%，经方法11处理的样品3种成分的含量均最高，总含量为16.229%，两种方法所得迷迭香酸的含量相差近11倍，而总二萜和总黄酮的含量相差1倍左右。纤花香茶菜品种经方法9处理的样品迷迭香酸含量最低，仅为0.064%，与最高组（方法11）1.124%相差近17倍，而经方法2处理的样品总二萜和总黄酮的含量均最低;经方法11处理的样品3种成分总含量最高，为11.299%。由此说明，溪黄草药材的产地前处理在一定程度上会影响该药材的质量。

3  小结与讨论

干燥是中药材生产与品质形成的重要环节，除少数需鲜用的药材外，绝大多数新采的药材均需经过干燥才能成为合格的商品药材。晒干是最常用、最简便、最经济的药材干燥方法，多数药材可用此法;阴干适用于不宜久晒或暴晒的药材，如薄荷[12]、当归等;烘干由于温度可控，不受天气影响，效率高而被广泛应用，但热风干燥会使药材的有效成分损失，甚至严重降低药材品质;远红外干燥适用于含水量大、有效成分对热不稳定、易腐烂变质或贵重药材及饮片的快速干燥，如鹿茸、西洋参等;微波干燥具有穿透力强、加热均匀、反应灵敏、热效率高、有效成分破坏少等优点，但不适用于热敏类成分的中药，如人参、杭白菊[13]等;真空冷冻干燥能很好地保持中药材的色、香、味，可最大程度地保留物料原有的天然品质，挥发性成分丢失少，但设备投资和运转费用高、冻干时间长、缺少在线快速检测水分的手段;高压电场干燥法干燥过程物料不升温，干燥条件灵活可调，伴有杀菌作用，设备造价低，节能，如赤芍、知母、厚朴[14]等的干燥可采用。中药干燥技术各有优劣，在具体应用中要针对所干燥药材的要求，采用最合适的加工方法。

为了充分发挥中药多成分性、多靶向性及多效应性的特色和优势，本试验依据溪黄草药材中主要有效成分迷迭香酸、总二萜、总黄酮的收率进行加工方法综合评价。根据试验结果，结合产地加工条件的可行性、方法的简便性、经济性，笔者建议中药溪黄草的产地加工方法如下：溪黄草品种采用鲜切段后再阴干的方法处理其品质较佳;线纹香茶菜和纤花香茶菜采用阴干后再干切段的方法处理其品质较佳。同属药材出现不同的最佳加工方法的结果可能与不同种的原因有关。本试验为寻找中药溪黄草的最佳产地加工方法提供了数据支持，对于溪黄草药材的产地加工和GAP基地的建设具有一定的指导意义，但溪黄草药材加工方法的改变对其化学成分和药效作用的影响的相关性还有待进一步研究。

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